pGRE-luc哺乳报告质粒

复制子： pUC 原核抗性： 氨苄青霉素Amp 筛选标记： 荧光素酶Luc 克隆菌株： 大肠杆菌DH5α 培养条件： 37℃

载体 pGRE-Luc 可以用来检测 GRE 信号通路活性。载体 pGRE-Luc 含有萤火虫来源的荧光 素酶基因。这个载体也包含多拷贝的 GRE 结合位点序列，并且该序列和一段 TATA-类似启 动子（PTAL）融合在一起，PTAL 源于单纯疱疹病毒胸苷激酶（HSV-TK）启动子。当内源性 的 GRE 蛋白结合到 GRE 增强元件时，转录起始，报告基因开始表达。 荧光素酶编码序列后有一段 SV40 多聚腺苷酸信号以确保在真核细胞中能正确有效的转录。 在 GRE 结合位点的上游有一段合成的转录抑制区（TB），该区域由多聚腺苷酸信号与转录 终止位点组成，以减少转录背景。该载体骨架也包含了一个 f1 复制起始区域以便进行单链 DNA 的复制，一个 pUC 复制起始位点以及一个氨苄抗性基因，便于进行培养筛选。 载体 pGRE-Luc 用来检测转录因子 GRE 与 GRE 增强子的作用，提供了直接检测这条通路活 性的途径。该载体可以和一个目的基因的表达载体共转来观察，其是否影响这条通路的活性。 荧光素酶是一种高敏感性的酶原性报告蛋白，适用于任何一种标准的荧光素酶检测法，可以 用来定量表达水平。pGRE-Luc 载体可以用任何一种标准的方法转染至哺乳动物细胞。为了 筛选稳定克隆，转染的载体通常含有抗性筛选基因如：neomycin，hygromycin 或者 puromycin。 合适的宿主系：DH5α 以及一些其他通用系。进行单链 DNA 的合成宿主菌需要包含一个 F’ episome，比如 JM109。 筛选标记：质粒为宿主 E.coli 提供了氨苄抗性（100ug/ml） E.coli 复制起始位点：pUC 拷贝数：~500 不相容质粒：pMB1/ColE1。

序列：