pET-42a质粒

基本信息

启动子： T7/lac

复制子： ColE1 ori，F1 ori

终止子： T7 terminator

质粒分类： 大肠杆菌载体；PET系列表达质粒

质粒大小： 5930bp

质粒标签： N-GST, N-6×His, N-S, C-6×His, N-Thrombin, N-Factor Xa

原核抗性： 卡那霉素Kan

克隆菌株： DH5α

培养条件： 37℃，有氧，LB

表达宿主： BL21(DE3)

诱导方式： IPTG或乳糖及其类似物

5'测序引物： T7：TAATACGACTCACTATAGGG

3'测序引物： T7-ter：TGCTAGTTATTGCTCAGCGG

质粒简介

pET42系列载体是用来进行克隆和高水平表达含有220个氨基酸的GST融合纯化标签的蛋白表达载体。

pET42a载体的单一的多克隆位点见上面的环状质粒图谱。注意：载体序列是以pBR322质粒的编码规矩进行编码的，所以T7蛋白表达区在质粒图谱上面是反向的。T7 RNA聚合酶启动的克隆和表达区域在质粒图谱中也被标注了出来。质粒的F1复制子是被定向的，所以在T7噬菌体聚合酶的作用下，包含有蛋白编码序列的病毒 粒子能够产生，并启动蛋白表达，同时蛋白表达将被T7终止子序列的作用下终止蛋白翻译。把表达的基因插入到载体的PshAI限制性内切酶位点时，可以通过Factor Xa蛋白酶将融合表达的GST标签完全切除。