一质粒简介:
pCMV-HA-UB 是泛素化工具质粒,
1. 泛素化修饰水平检测
将该质粒转染入细胞后,可表达带HA标签的泛素蛋白。通过抗HA抗体进行免疫沉淀(IP),再用目标蛋白的抗体做Western Blot,就能检测目标蛋白的泛素化水平,判断其是否被泛素标记。
2. 蛋白降解机制研究
结合蛋白酶体抑制剂(如MG132)处理细胞,对比处理前后目标蛋白的泛素化水平与蛋白量,可验证目标蛋白是否通过泛素-蛋白酶体途径降解。
3. 泛素化相关蛋白的互作分析
利用HA标签的免疫沉淀实验,可捕获与泛素化蛋白相互作用的其他分子,解析泛素化修饰如何调控蛋白间的相互作用。
4. 泛素链类型分析
可通过构建泛素突变体(如K48R、K63R),研究不同类型泛素链(如K48连接的降解信号、K63连接的信号转导信号)对目标蛋白功能的影响。

- 序列:
- GAGTTCGAGCTTGCATGCCTGCAGGTCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTAT
- GTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGT
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- GACACCATTGAGAATGTCAAGGCAAAGATCCAAGACAAGGAAGGCATCCCTCCTGACCAGCAGAGGTTGATCTTTGCTGGGAAACAGCTGGAAGATGGACGCACC
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- GATAACTACGATACGGGAGGGCTTACCATCTGGCCCCAGTGCTGCAATGATACCGCGAGACCCACGCTCACCGGCTCCAGATTTATCAGCAATAAACCAGCCAGC
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- GCACCATATGCGGTGTGAAATACCGCACAGATGCGTAAGGAGAAAATACCGCATCAGGCGCCATTCGCCATTCAGGCTGCGCAACTGTTGGGAAGGGCGATCGGT
- GCGGGCCTCTTCGCTATTACGCCAGCTGGCGAAAGGGGGATGTGCTGCAAGGCGATTAAGTTGGGTAACGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGACGTTGTAAAACGAC
- GGCCAGT