LentiGuide-Puro质粒

质粒简介：

lentiGuide-Puro 是CRISPR-Cas9基因编辑的专用慢病毒载体，
1. 表达sgRNA，实现基因敲除/修饰
它本身不携带Cas9蛋白，需要搭配表达Cas9的细胞系（如提前用lentiCas9-Blast感染细胞）使用。将设计好的sgRNA序列克隆到U6启动子下游，感染细胞后，sgRNA引导Cas9蛋白靶向切割基因组DNA，实现基因敲除、激活或抑制。
2. 慢病毒介导的稳定细胞株构建
利用慢病毒的整合特性，将sgRNA稳定整合到宿主细胞基因组中，搭配嘌呤霉素筛选，获得稳定表达sgRNA的细胞系，适用于长期基因功能研究、高通量筛选。
3、它属于双载体CRISPR系统，必须与Cas9表达载体（如lentiCas9-Blast）配合使用，单独感染无法实现基因编辑。
- 克隆方法：通常通过BsmBI（图谱中SmaI、BfuAI等位点）酶切，将退火的sgRNA寡核苷酸链连接到载体中。
- 筛选条件：嘌呤霉素的筛选浓度需要提前用目标细胞系做梯度测试，一般为1-5 μg/mL，确保未感染细胞全部死亡。

产品图谱及序列 展开 +