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pCANTAB-5E(非空载)噬菌体展示质粒

  • 货号：KL-ZL3112-3ug
  • 培养条件：37℃，有氧，LB 质粒简介
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KL-ZL3112-3ug pCANTAB-5E(非空载)噬菌体展示质粒 3ug

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》产品信息

货号 名称 规格
KL-ZL3112 pCANTAB-5E(非空载)噬菌体展示质粒

3ug

》产品描述

质粒大小： 5216bp 质粒标签： N-g3 signal，C-E tag 原核抗性： 氨苄青霉素Amp 克隆菌株： 大肠杆菌DH5α 培养条件： 37℃，有氧，LB

》产品简介

》产品图谱及序列

质粒大小： 5216bp
质粒标签： N-g3 signal，C-E tag
原核抗性： 氨苄青霉素Amp
克隆菌株： 大肠杆菌DH5α
培养条件： 37℃，有氧，LB
质粒简介：
本系统是用于抗体基因表达，制备重组抗体。宿主菌 TG1 为质粒载体pCANTAB5e 复制和表达的宿主菌，无抗性，用 2×YT 培养基，37℃进行培养。载体 pCANTAB5e 为用于构建重组单链抗体 scFv 的载体，具有氨苄抗性，大小为4522bp，具体图谱及酶切位点如下示。辅助噬菌体 M13K07 用于拯救噬菌粒，具有卡那抗性，在其辅助下噬菌粒得以复制，并以融合的形式表达在噬菌体表面。在 scFv 基因后面含有一段编码 Tag 尾肽（E-Tag）的序列，在尾肽后面有一琥珀（Amber）终止密码子，位于 scFv 基因与 cpIII 基因之间，在抑制型细菌 TG1 中，这种琥珀密码子只有 20％有效，故在蛋白翻译过程中可以通读而形成 scFv-cpIII融合蛋白；但在非抑制型菌株中，如 HB2151，此终止子被识别，同时 scFv 基因在翻译过程中在 cpIII 基因前终止，形成独立的抗体蛋白，滞留于细胞膜间隙，并在长时间培养后泄漏在培养液中，形成可溶性表达。
【操作方法】本方法来源于网络，我们未做验证，仅供参考。
1. 辅助噬菌体毒种制备
1) 将辅助噬菌体 M13K07 划线于 2×YT 琼脂平板上；
2) 制备 2×YT 半固体琼脂（0.7％琼脂）为上层琼脂（Top Agar），冷却至 50 ℃时，取 4 mL Top Agar 并加入 0.5 mL 过夜培养的新鲜 TG1 菌（OD660 达 0.8），充分混匀，沿着划线浓度从低至高的方向，倾注 Top Agar；
3) 37℃培养 6-12 小时，用接种针挑取单个噬菌斑，接种于 30-200 mL 2×YT-K（kanamycin 70 μg/mL），37℃充分振荡培养 10-14 小时；
4) 8000 rpm 离心 15 min，4 ℃；
5) 小心取上清，建议用 0.45μm 滤膜过滤后，分装无菌小管，存放 4℃至少可用半年。
2．噬菌体毒种的滴定
1) 准备不含任何抗生素的 2×YT 培养平板 5-6 个；
2) 用 2×YT 培养基配制 0.7%琼脂平板，即为表层琼脂（Top Agar），冷却至 42℃并在 42℃恒温保存；
3) 将上述噬菌体溶液用培养基做 10-6、10-7、10-8、10-9、10-10 稀释；
4) 取过夜培养的 TG1 菌液（OD660=1 左右），分装小试管，500μL /小试管，标明10-6 至 10-10 稀释度；
备注：宿主菌的制备请参照 TG1 菌株说明书进行。
5) 加入以上步骤 3 中依次稀释的噬菌体 100μL 到每个相应的标准稀释度的试管中，充分混匀，37℃轻柔振荡反应 30 min；
6) 加入 Top Agar 3 mL 至每个试管中，立即浇注事先准备好的平皿，37℃培养过夜；
7) 计算平皿上的空斑数，乘于相应稀释倍数，一般浓度可达 1012pfu/mL。
【注意事项】
1．噬菌体毒种，在使用前应按以上推荐的方法进行浓度滴定；
2．噬菌体毒种存放在 4℃下即可，不可-20℃或更低温度冻存；

序列：
ORIGIN
1 gacgaaaggg cctcgtgata cgcctatttt tataggttaa tgtcatgata ataatggttt
61 cttagacgtc aggtggcact tttcggggaa atgtgcgcgg aacccctatt tgtttatttt
121 tctaaataca ttcaaatatg tatccgctca tgagacaata accctgataa atgcttcaat
181 aatattgaaa aaggaagagt atgagtattc aacatttccg tgtcgccctt attccctttt
241 ttgcggcatt ttgccttcct gtttttgctc acccagaaac gctggtgaaa gtaaaagatg
301 ctgaagatca gttgggtgct cgagtgggtt acatcgaact ggatctcaac agcggtaaga
361 tccttgagag ttttcgcccc gaagaacgtt ttccaatgat gagcactttt aaagttctgc
421 tatgtggcgc ggtattatcc cgtattgacg ccgggcaaga gcaactcggt cgccgcatac
481 actattctca gaatgacttg gttgagtact caccagtcac agaaaagcat cttacggatg
541 gcatgacagt aagagaatta tgcagtgctg ccataaccat gagtgataac actgcggcca
601 acttacttct gacaacgatc ggaggaccga aggagctaac cgcttttttg cacaacatgg
661 gggatcatgt aactcgcctt gatcgttggg aaccggagct gaatgaagcc ataccaaacg
721 acgagcgtga caccacgatg cctgtagcaa tggcaacaac gttgcgcaaa ctattaactg
781 gcgaactact tactctagct tcccggcaac aattaataga ctggatggag gcggataaag
841 ttgcaggacc acttctgcgc tcggcccttc cggctggctg gtttattgct gataaatctg
901 gagccggtga gcgtgggtct cgcggtatca ttgcagcact ggggccagat ggtaagccct
961 cccgtatcgt agttatctac acgacgggga gtcaggcaac tatggatgaa cgaaatagac
1021 agatcgctga gataggtgcc tcactgatta agcattggta actgtcagac caagtttact
1081 catatatact ttagattgat ttaaaacttc atttttaatt taaaaggatc taggtgaaga
1141 tcctttttga taatctcatg accaaaatcc cttaacgtga gttttcgttc cactgagcgt
1201 cagaccccgt agaaaagatc aaaggatctt cttgagatcc tttttttctg cgcgtaatct
1261 gctgcttgca aacaaaaaaa ccaccgctac cagcggtggt ttgtttgccg gatcaagagc
1321 taccaactct ttttccgaag gtaactggct tcagcagagc gcagatacca aatactgttc
1381 ttctagtgta gccgtagtta ggccaccact tcaagaactc tgtagcaccg cctacatacc
1441 tcgctctgct aatcctgtta ccagtggctg ctgccagtgg cgataagtcg tgtcttaccg
1501 ggttggactc aagacgatag ttaccggata aggcgcagcg gtcgggctga acggggggtt
1561 cgtgcataca gcccagcttg gagcgaacga cctacaccga actgagatac ctacagcgtg
1621 agcattgaga aagcgccacg cttcccgaag ggagaaaggc ggacaggtat ccggtaagcg
1681 gcagggtcgg aacaggagag cgcacgaggg agcttccagg gggaaacgcc tggtatcttt
1741 atagtcctgt cgggtttcgc cacctctgac ttgagcgtcg atttttgtga tgctcgtcag
1801 gggggcggag cctatggaaa aacgccagca acgcggcctt tttacggttc ctggcctttt
1861 gctggccttt tgctcacatg ttctttcctg cgttatcccc tgattctgtg gataaccgta
1921 ttaccgcctt tgagtgagct gataccgctc gccgcagccg aacgaccgag cgcagcgagt
1981 cagtgagcga ggaagcggaa gagcgcccaa tacgcaaacc gcctctcccc gcgcgttggc
2041 cgattcatta atgcagctgg cacgacaggt ttcccgactg gaaagcgggc agtgagcgca
2101 acgcaattaa tgtgagttag ctcactcatt aggcacccca ggctttacac tttatgcttc
2161 cggctcgtat gttgtgtgga attgtgagcg gataacaatt tcacacagga aacagctatg
2221 accatgatta cgccaagctt tggagccttt tttttggaga ttttcaacgt gaaaaaatta
2281 ttattcgcaa ttcctttagt tgttcctttc tatgcggccc agccggccat ggcccaggtg
2341 aagctgcagc agtcaggacc tggcctggtg gcgccctcac agagcctgtc catcacatgc
2401 accgtctcag ggttttcatt aaccagctat ggtgtacact gggttcgcca gcctccagga
2461 aagggtctgg agtggctggg agtaatatgg gctggtggaa gcacaaacta taattcagct
2521 ctcaaatcca gactgaacat cagcaaggac aactccaaga gccaagtttt cttaaaaatg
2581 aacagtctcc aaactgatga cacagccatg tactactgtg ccagaaactg gggcagctac
2641 tggtacttcg atgtctgggg ccaaggccac ggtcaccgtc tcctcagtgg aggcggttca
2701 ggcggaggtg gcggaggtgg ctctggcggt ggcggatcgg acattgagct cacccagtct
2761 ccagcaatca tgtctgcatc tccaggggaa aaggtcacca tgacctgcag ggccagctca
2821 agtataagtt ccagttactt gcactggtac cagcagaagt caggcgcttc ccccaaaccc
2881 ttgattcata ggacatccaa cctggcttct ggagtcccag ctcgcttcag tggcagtggg
2941 tctgggacct cttactctct cacaatcagc agcgtggagg ctgaagatga tgcaacttat
3001 tactgccagc agtggagtgg ttacccattc acgttcggtg ctgggaccaa gctcgagatc
3061 aaacgggcgg ccgcaggtgc gccggtgccg tatccggatc cgctggaacc gcgtgccgca
3121 tagactgttg aaagttgttt agcaaaacct catacagaaa attcatttac taacgtctgg
3181 aaagacgaca aaactttaga tcgttacgct aactatgagg gctgtctgtg gaatgctaca
3241 ggcgttgtgg tttgtactgg tgacgaaact cagtgttacg gtacatgggt tcctattggg
3301 cttgctatcc ctgaaaatga gggtggtggc tctgagggtg gcggttctga gggtggcggt
3361 tctgagggtg gcggtactaa acctcctgag tacggtgata cacctattcc gggctatact
3421 tatatcaacc ctctcgacgg cacttatccg cctggtactg agcaaaaccc cgctaatcct
3481 aatccttctc ttgaggagtc tcagcctctt aatactttca tgtttcagaa taataggttc
3541 cgaaataggc agggtgcatt aactgtttat acgggcactg ttactcaagg cactgacccc
3601 gttaaaactt attaccagta cactcctgta tcatcaaaag ccatgtatga cgcttactgg
3661 aacggtaaat tcagagactg cgctttccat tctggcttta atgaggatcc attcgtttgt
3721 gaatatcaag gccaatcgtc tgacctgcct caacctcctg tcaatgctgg cggcggctct
3781 ggtggtggtt ctggtggcgg ctctgagggt ggcggctctg agggtggcgg ttctgagggt
3841 ggcggctctg agggtggcgg ttccggtggc ggctccggtt ccggtgattt tgattatgaa
3901 aaaatggcaa acgctaataa gggggctatg accgaaaatg ccgatgaaaa cgcgctacag
3961 tctgacgcta aaggcaaact tgattctgtc gctactgatt acggtgctgc tatcgatggt
4021 ttcattggtg acgtttccgg ccttgctaat ggtaatggtg ctactggtga ttttgctggc
4081 tctaattccc aaatggctca agtcggtgac ggtgataatt cacctttaat gaataatttc
4141 cgtcaatatt taccttcttt gcctcagtcg gttgaatgtc gcccttatgt ctttggcgct
4201 ggtaaaccat atgaattttc tattgattgt gacaaaataa acttattccg tggtgtcttt
4261 gcgtttcttt tatatgttgc cacctttatg tatgtatttt cgacgtttgc taacatactg
4321 cgtaataagg agtcttaata agaattcact ggccgtcgtt ttacaacgtc gtgactggga
4381 aaaccctggc gttacccaac ttaatcgcct tgcagcacat ccccctttcg ccagctggcg
4441 taatagcgaa gaggcccgca ccgatcgccc ttcccaacag ttgcgcagcc tgaatggcga
4501 atggcgcctg atgcggtatt ttctccttac gcatctgtgc ggtatttcac accgcatata
4561 aattgtaaac gttaatattt tgttaaaatt cgcgttaaat ttttgttaaa tcagctcatt
4621 ttttaaccaa taggccgaaa tcggcaaaat cccttataaa tcaaaagaat agcccgagat
4681 agggttgagt gttgttccag tttggaacaa gagtccacta ttaaagaacg tggactccaa
4741 cgtcaaaggg cgaaaaaccg tctatcaggg cgatggccca ctacgtgaac catcacccaa
4801 atcaagtttt ttggggtcga ggtgccgtaa agcactaaat cggaacccta aagggagccc
4861 ccgatttaga gcttgacggg gaaagccggc gaacgtggcg agaaaggaag ggaagaaagc
4921 gaaaggagcg ggcgctaggg cgctggcaag tgtagcggtc acgctgcgcg taaccaccac
4981 acccgccgcg cttaatgcgc cgctacaggg cgcgtactat ggttgctttg acgggtgcag
5041 tctcagtaca atctgctctg atgccgcata gttaagccag ccccgacacc cgccaacacc
5101 cgctgacgcg ccctgacggg cttgtctgct cccggcatcc gcttacagac aagctgtgac
5161 cgtctccggg agctgcatgt gtcagaggtt ttcaccgtca tcaccgaaac gcgcga

货号 产品名称 规格 库存 价格 数量 购买
KL-ZL3343-3ug pT7-7大肠表达质粒 3ug

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