慢病毒的储存与稀释
1.病毒的储存：收到病毒液后在很短时间内即使用慢病毒进行实验，可以将病 毒暂时放置于 4℃保存；如需长期保存请放置于-80℃。
①病毒可以存放于-80℃ 6 个月以上；但如果病毒储存时间超过 6 个月， 建议在使用前需要重新测定病毒滴度。
②反复冻融会降低病毒滴度：每次冻融会降低病毒滴度 10%；因此在病毒 使用过程中应尽量避免反复冻融，为避免反复冻融，建议收到病毒后按照每次的
使用量进行分装。 
2.病毒的稀释：如果需要稀释病毒，请将病毒取出置于冰浴融解后，使用 PBS 缓冲液或培养目的细胞无血清培养基 (含血清或含双抗不影响病毒感染) 稀释病 毒，混匀分装后使用，或 4℃保存(但尽量在 2~3 天内用完)。
★慢病毒感染目的细胞预实验
在正式实验前，需要进行慢病毒感染目的细胞的预实验，该实验的目的：第
一，检测慢病毒是否能够感染目的细胞；第二，慢病毒感染目的细胞的最佳条件     (即最佳的 MOI 值) 。MOI 值即为病毒数：细胞数的比值， MOI=100 即为需要 用 100 倍与细胞数的病毒进行感染。 通常使用带有荧光标记的慢病毒。具体实 验步骤如下：
1.以 96 孔板为例，实验前一天分别接种 0.5~ 1×104 个目的细胞于 96 孔培养板 中(至少接种 5 个孔的细胞)，所加完全培养基体积为 100µl。不同种类的细 胞生长速度有所差异，为保证有较好的实验结果， 进行病毒感染时细胞的融 合率约为 50~60%。
2. 第二天用含终浓度为 8µg/mLpolybrene 完全培养基换液，每孔加 90µl 。PS ： polybrene 不是必须的，但加入 polybrene 可以将病毒感染细胞的效率提高数 倍，但也可能对某些细胞具有毒性。
3.用含有 polybrene 的完全培养基 10 倍梯度稀释病毒(以滴度为 1×108TU/ml 的 病毒为例)，具体做法如下：取一个 96 孔板，每孔含有 90µl 培养基，第一 个孔加入 10µl 待测病毒原液，混匀后吸取 10µl 病毒混合液至第二个孔(混 匀时尽量不要产生气泡) 。这样就得到了三个不同梯度的病毒：原液、10 倍 稀释、 100 稀释。

4. 各吸取 10µl 病毒稀释液到相对应的 96 孔板中，将三个不同梯度的病毒液，  各取 10µl 加到每组的三个孔中，计算可知，三个孔的 MOI 分别为 100 、10 、  1。
( 如果所用的病毒滴度未达到 1×108TU/ml，则相应增加病毒体积使得能够得到 不同的 MOI 。客户也可以根据不同的稀释倍数，摸索更为细致的 MOI 值)。
5.将细胞置于 37℃ ，5%CO2  培养箱培养过夜，16~24 小时后用新鲜的完全培 养基换液(DMEM+10%FBS+P/S)。
6.感染 48~72 小时后，观察荧光表达情况。对于生长迟缓代谢慢的细胞，可以 适当延长观察时间，中途可以换液保持细胞的良好状态。根据细胞的生长状 况、荧光表达情况综合判断病毒在哪个稀释度下作用效果最好 (即最适的 MOI 值)，并以此稀释度下的病毒浓度作为后继实验的依据。
注意:在进行细胞感染时，请选择生长状态良好的细胞进行感染， 并根据适当的 MOI 值以确定好适宜的感染剂量，过高滴度的感染剂量会对细胞产生毒性甚至 死亡。若是用于免疫实验，请根据不同的动物和不同的免疫途径确定合适的免疫 剂量。