质粒扩增操作说明

质粒扩增操作说明
（1）上海柯雷生物提供质粒如没有特殊标记均为小提质粒，每支干粉量在3-5ug左右。
（2）质粒干粉一般常温运输，大题液体质粒加冰袋运输。
各位老师收到质粒干粉请自己提取。
具体提取步骤如下：
一、扩增流程

         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。

        1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养）

        ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；

        ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；

        ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；

        ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；

        ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；

（如果菌落过多，请将质粒稀释后再转化。如果无菌落，请加入10μl质粒离心全涂转化）

        ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。

        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期30天，请务必划线挑单克隆培养）

四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。

        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）

穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。

        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）

直接挑取单菌落至液体培养基中。

        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期30天）

单独提取的液体质粒收到后可直接使用。