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质粒扩增操作说明

时间:2021-08-01 17:25    点击量:

质粒扩增操作说明
(1)上海柯雷生物提供质粒如没有特殊标记均为小提质粒,每支干粉量在3-5ug左右。
(2)质粒干粉一般常温运输,大题液体质粒加冰袋运输。
各位老师收到质粒干粉请自己提取。
具体提取步骤如下:
一、扩增流程
         收到产品后,请先根据产品管壁标签来判断产品形式,并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
        1、质粒干粉(常温运输,存于-20度,90天保质期,请务必转化挑单克隆培养)
        ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒;
        ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42℃热激60s,不要搅动,再冰浴2min;
        ③加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37℃培养45min;
        ④6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
        ⑤将平板正向培养1h,再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h;
(如果菌落过多,请将质粒稀释后再转化。如果无菌落,请加入10μl质粒离心全涂转化)
        ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种(冰袋运输,存于-80℃,保质期30天,请务必划线挑单克隆培养)
四区划线后挑单菌落培养,酵母菌需要先液体复苏再四区划线,再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种(冰袋运输,存于4℃,保质期7天)
穿刺接种,液体培养后四区划线,再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板(冰袋运输,存于4℃,保质期7天)
直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒(冰袋运输,存于-20℃,保质期30天)
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
 

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